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技术文章

猪瘟病毒特征

1.形态和理化学特性  

    研究猪瘟病毒的主要困难,一是除猪肾细胞,还没有找到更好的增殖 病毒的 敏感细胞(虽然能在多种细胞内增殖),二是猪瘟病毒在细胞培养物中不产生肉眼可见的细胞 病变。现在用于增殖猪瘟病毒的更加好细胞,依然是原代和继代猪肾细胞,例如PK15细胞。在PK15细胞中增殖的病 毒,用聚乙二醇(PEG)及硫酸铵沉淀后,再经超速离心及梯度密度离心浓缩和提纯,即可获得纯化的病毒制品。  病毒粒子的直径为34~50nm(图224),有二十面体对称的核衣壳, 内部核心直径 约30nm。病毒粒子略呈圆形,具有脂蛋白囊膜。在蔗糖密度梯度中的浮密度为115~1 16g/cm。等电点是48。从电镜照片上观察,可见病毒粒子表面具有脆弱的纤突结构。

  猪瘟病毒的基因组为单股线状RNA,分子量约为4×106Da。Meyers等和Moo rmann等分别对Alfort株和Brescia株进行了分子克隆和全序列测定,发现Bres cia株基因组长为12 283个nt,而Alfort株则为12 284个nt, 它们仅含有一个长开放 阅读框架,编码3 898个氨基酸残基,氨基酸同源性达93%。涂长春等完成了石 门株部分cDNA的分子克隆和序列分析,并与Brescia株和Alfort株进行了比较。  HCV含有四种结构蛋白,其中3种是糖蛋白,但对病毒的非结构蛋白了解不多。目前关于 病毒蛋白的大量研究并非源于同一株病毒,加上电泳结果不尽一致, 各种病毒的蛋 白分子量也不尽相同,结构蛋白由N端到C端为P14/E0/E1/E2。 P14为非糖基化的核衣壳蛋 白,后三种为组成病毒囊膜结构的3种糖蛋白,E0分子量大约在42~48kDa之间, E1分子 量在25~33kDa之间,E2分子量在51~55kDa之间。  猪瘟病毒不耐热,56℃ 60分钟使其灭活。60℃ 10分钟使其完全丧失致病力。  猪瘟病毒在pH5~10稳定,但不耐受pH3。猪瘟病毒在pH29于室温下5小时,滴度由 1055下降到1020TCID50。MgCl2在50℃没有稳定作用。病毒对乙醚、氯仿和去氧胆酸盐敏感,迅速丧失感染性。对胰蛋白酶有中等度的敏 感性。二甲基亚砜(DMSO)对病毒囊膜中的脂质和脂蛋白有稳定作用。10% DMSO液中的猪 瘟病毒对反复冻融有耐受性。
2.抗原性  
    猪瘟病毒只有一个抗原型。中国兽药监察所在选择制苗用毒种时, 发 现国内外7 株猪瘟病毒在猪和兔都有交叉免疫性。但自1976年以来,美国、法国和日本的一些学者根 据血清中和试验,证明猪瘟病毒具有血清学变种。美国较早从非典型猪瘟病例分离到致 病力低的毒株,例如Mengeling报道的“331慢性猪瘟毒株” 是从美国衣阿华州一次流行中分离获得的。此株病毒在实验感染时只产生持续性感染。 比较331株和强毒Ames株的抗原性,也发现不尽一致(Dirtle,1971)。 法国也证明 猪瘟病毒存在血清学变种,并认为至少有两个血清学亚组:I组包括许多强毒株和绝大多数 的疫苗用弱毒株,Ⅱ组包括引起慢性猪瘟的低毒力毒株, 如美国的331株以及通常分离 的几株慢性猪瘟病毒。这些低毒力毒株对猪的免疫力,与弱毒疫苗株病毒不同,通常不能产 生明显的血清中和抗体,在用强毒攻击时,往往呈现厌食和高热等临床反应。但是 C株和Thiveoval株等弱毒疫苗却可完全保护猪体不受这些血清学变种的感染。猪瘟病毒和牛腹泻粘膜病病毒具有共同的可溶性抗原。 应用去垢剂从感染细胞中 分离猪瘟病毒糖蛋白,证明其在血清学上与BVDMD病毒有交叉反应,而且还可使猪抵抗 猪瘟强毒的攻击。某些国家在猪瘟流行病学调查和防制工作中发生的一个问题,就是猪群中存 在抗BVDMD病毒的抗体,但滴度不高,例如爱尔兰已无猪瘟病毒感染,但在牛和猪混牧 的牧场中出现BVDMD抗体的阳性率高达28%。据推测,这是猪与牛和绵羊接触的结果。  澳大利亚在消灭猪瘟几年后,仍在一些猪中发现猪瘟中和抗体,且在这些猪中,抗BVD MD病毒的血清抗体的滴度更高。试验证实,猪在接种无毒力的猪瘟病毒以后,仅产生对 这株病毒的中和抗体,随后再攻击以猪瘟强毒,使其对猪瘟病毒的抗体增加,但对BVD MD病毒仅有很低或者根本没有抗体反应。相反,猪在接种TVM2株BVDMD病毒以后,虽不 产生任何临床症状,但却可以产生一定程度的抗猪瘟强毒攻击的保护力。有人认为,BV DMD病毒可能是猪瘟病毒的一个特殊的血清学变种:对猪似已减毒, 但充分适应了牛 和绵羊

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